需要高内涵成像来对后生动物组织中存在的各种细胞表型和多细胞生态系统进行分类。我们最近开发了迭代漂白扩展多重性 (IBEX)，这是一种迭代免疫标记和化学漂白方法，可以在不同组织中进行多重成像（>65 个参数），包括与国际联盟努力相关的人体器官。IBEX 与超过 250 种市售抗体和 16 种独特的荧光团兼容，并且可以使用载玻片和非专有成像室轻松应用于不同的成像平台。整个协议包括抗体标记、成像和化学漂白的迭代循环，具有基本实验室技能的生物学家可以在 2-5 天内以相对较低的成本完成。为了支持广泛采用，我们提供有关组织处理的详细信息、经过验证的抗体的精选列表和用于多重成像的组织特异性面板。此外，还包括有关如何使用价格具有竞争力的仪器和试剂使该方法自动化的说明。最后，我们提出了一种用于图像对齐的软件解决方案，该解决方案可由没有编程经验的个人使用开源软件和免费软件执行。总而言之，IBEX 是一种非商业方法，可以很容易地由学术实验室实施并进行扩展，以实现不同组织的高内涵映射，以支持人类参考图谱或其他此类应用。包括有关如何使用价格具有竞争力的仪器和试剂使方法自动化的说明。最后，我们提出了一种用于图像对齐的软件解决方案，该解决方案可由没有编程经验的个人使用开源软件和免费软件执行。总而言之，IBEX 是一种非商业方法，可以很容易地由学术实验室实施并进行扩展，以实现不同组织的高内涵映射，以支持人类参考图谱或其他此类应用。包括有关如何使用价格具有竞争力的仪器和试剂使方法自动化的说明。最后，我们提出了一种用于图像对齐的软件解决方案，该解决方案可由没有编程经验的个人使用开源软件和免费软件执行。总而言之，IBEX 是一种非商业方法，可以很容易地由学术实验室实施并进行扩展，以实现不同组织的高内涵映射，以支持人类参考图谱或其他此类应用。

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High-content imaging is needed to catalog the variety of cellular phenotypes and multicellular ecosystems present in metazoan tissues. We recently developed iterative bleaching extends multiplexity (IBEX), an iterative immunolabeling and chemical bleaching method that enables multiplexed imaging (>65 parameters) in diverse tissues, including human organs relevant for international consortia efforts. IBEX is compatible with >250 commercially available antibodies and 16 unique fluorophores, and can be easily adopted to different imaging platforms using slides and nonproprietary imaging chambers. The overall protocol consists of iterative cycles of antibody labeling, imaging and chemical bleaching that can be completed at relatively low cost in 2–5 d by biologists with basic laboratory skills. To support widespread adoption, we provide extensive details on tissue processing, curated lists of validated antibodies and tissue-specific panels for multiplex imaging. Furthermore, instructions are included on how to automate the method using competitively priced instruments and reagents. Finally, we present a software solution for image alignment that can be executed by individuals without programming experience using open-source software and freeware. In summary, IBEX is a noncommercial method that can be readily implemented by academic laboratories and scaled to achieve high-content mapping of diverse tissues in support of a Human Reference Atlas or other such applications.